摘要：目的制备鼠抗人CD137抗体,并对该抗体进行人源化改造。方法构建h CD137-p CDNA3.4真核表达质粒,经293F细胞表达纯化及鉴定后,获得CD137蛋白。制备p HAGE-CMV-MCS-IRES-Zs Green-h CD137的慢病毒,感染HEK-293FT细胞,获得用来筛选杂交瘤的CD137转基因细胞株。将CD137蛋白免疫小鼠,检测小鼠血清抗体效价,将免疫小鼠的脾脏和骨髓瘤细胞SP2/0融合,采用ELISA方法及流式细胞术对小鼠杂交瘤进行筛选。将筛选后的杂交瘤细胞接种小鼠,获得腹水。对抗体亚型和抗体效价进行测定,并通过竞争结合抑制实验等方法对所获的CD137单抗的生物学特性进行分析鉴定。提取该m Ab杂交瘤细胞株的总RNA逆转录成c DNA,进行鼠抗人CD137抗体可变区序列克隆,构建人源化抗体重链和轻链表达载体,瞬时转染HEK-293FT,检测分析各重组人源化抗体与抗原的亲和力。结果获得1株CD137单抗（6F5）,该抗体与CD137L有竞争作用。蛋白结合表位在A.A 30-100。6F5能够激活NF-κB信号通路,对外周血单个核细胞增殖具有显著促进作用,且人源化后抗体的亲和力不变。结论成功制备1株CD137人源化抗体,该人源化抗体为下一步开展体内肿瘤治疗奠定了基础。
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关键词：cd137 单克隆抗体 t细胞激活
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