摘要：旨在检测p21基因在水牛卵母细胞体外成熟过程中的表达变化，并克隆摩拉水牛p2l基因CDs序列，构建真核表达载体。收集体外成熟培养不同时期（0、6、12、24h）和不同形态[有第1极体（first polar body，PBl）PBl和无PB1]的水牛卵母细胞，通过RT-qPCR检测其p21mRNA相对表达量。同时利用RT-PCR技术从摩拉水牛卵巢颗粒细胞中扩增出p21基N编码序列，插入pEGFP-N1真核表达载体中，构建出重组质粒。将重组质粒pEGFP-N1-p21转染水牛颗粒细胞，并于培养24h和48h后观察转染细胞的荧光表达情况。收集转染48h后的颗粒细胞，通过RT-qPCR检测p21mRNA相对表达量。结果显示，成熟培养6h的卵母细胞p21mRNA表达量显著高于成熟培养0、12、24h的表达量（P〈0.05），有PB1的卵母细胞中p21mRNA的表达量显著高于无PBl的卵母细胞（P〈0．05）；重组质粒pEGFP-N1-p21转染颗粒细胞后，有绿色荧光蛋白表达，且与转柒pEGFPN1和空白组相比，pEGFP-N1-p21转染组的p21mRNA表达量显著升高。结果表明，在体外成熟培养过程中均能检测到水牛卵母细胞p21tuRNA表达量，成功构建了摩拉水牛p21基因真核表达载体，为下一步研究p21基N在水牛卵母细胞成熟和胚胎发育过程中的功能和调控奠定了基础。
分类：期刊> 自然科学与工程技术> 农业科技> 畜牧与动物医学
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关键词：摩拉水牛 p21基因表达 颗粒细胞
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