摘要：目的探讨低浓度过氧化氢（H2O2）对小鼠表皮干细胞（mESCs）体外促增殖作用及其机制.方法：以酶消化法分离培养mESCs.免疫荧光技术鉴定第3 代mESCs β1 整合素和角蛋白19（K19）表达,流式细胞术鉴定CD34 的表达;以不同低浓度H2O2（0、25、50、100、150 和200 μmol/L）处理mESCs 48 h 和72h.同时,另-组实验中在用不同浓度H2O2 刺激的同时加入或不加入雷帕霉素（50 ng/ml）培养48 h.甲氮甲唑蓝（MTT）法检测细胞增殖; Western Blot 法检测H2O2 刺激小鼠mESCs 48 h Akt/mTOR 信号通路关键蛋白mTOR、Akt、P70s6k、eIF4E、4E-BP1、p-mTOR、p-Akt、p-P70s6k、p-eIF4E、p-4E-BP1 和细胞增殖相关蛋白CyclinD1、增殖细胞核抗原（PCNA）的表达.结果：免疫荧光技术检测分离培养的mESCs 细胞100% 表达 β1 整合素和K19;流式细胞术检测99.8%的mESCs 表达CD34;MTT 检测结果显示,48 h 和72 h 时25 μmol/L 和50 μmol/L 的H2O2 可以有效地促进mESCs 的增殖（P〈0.05）,而雷帕霉素能拮抗这-效应;但当H2O2 浓度为200 μmol/L时,则显著抑制mESCs 增殖 （P〈0.05）;免疫印迹结果显示低浓度H2O2 处理mESCs 48 h 后,Akt/mTOR 信号通路关键蛋白mTOR、Akt、eIF4E、4E-BP1 水平及其磷酸化水平（p-mTOR、p-eIF4E、p-4E-BP1）显著增加 （P〈0.05或P〈0.01）,当H2O2 浓度为200 μmol/L 时则抑制其表达 （P〈0.05 或P〈0.01）.此外,50 μmol/L 的H2O2 能上调细胞周期蛋白Cyclin D1 和PCNA 的表达,而雷帕霉素能拮抗这-作用.结论：低浓度的H2O2 对mESCs 有明显的促增殖作用,并且能激活Akt/mTOR 通路.而低浓度H2O2 对mESCs 的促增殖作用至少部分是通过活化Akt/mTOR 信号通路介导的.
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关键词：表皮干细胞 过氧化氢 细胞增殖
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