摘要：目的：构建人核内不均一核糖核蛋白A2／B1（hnRNPA2／B1）基因的短发夹RNA（shRNA）慢病毒载体。方法：根据hnRNPA2／B1基因序列，设计4对hnRNPA2／B1shRNA的干扰序列和1对阴性对照序列（NC—ShRNA）；合成靶序列双链DNA，与pGMLV—SC5RNAi慢病毒载体连接，通过测序鉴定阳性克隆；用构建的慢病毒表达载体和包装质粒共转染HEK293T细胞，荧光显微镜下观察转染病毒72h后细胞中绿色荧光蛋白的表达，以验证共转染是否成功，超滤法浓缩病毒原液并测定病毒滴度。结果：经酶切和BLAST对测序结果比对，重组克隆中插入的序列与设计合成的4对shRNA及1对阴性对照oligoDNA完全一致，提示慢病毒载体构建成功；荧光显微镜下，HEK293T细胞可见强绿色荧光蛋白表达，慢病毒载体成功共转染入HEK293T细胞，病毒滴度为5×10^11TU／L。结论：成功构建人hnRNPA2／B1基因shRNA慢病毒载体，病毒滴度达5×10^11TU／L。
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关键词：rna干扰 慢病毒 293t细胞 载体 短发夹rna 核内不均一核糖核蛋白基因
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