摘要:目的:探讨短发夹RNA(shRNA)干扰趋化因子受体4(CXCR4)表达对卵巢癌细胞株SKOV3侵袭能力及细胞凋亡的影响。方法:将带有绿色荧光蛋白的慢病毒载体转染卵巢癌细胞株SKOV3,设计特异shRNA将其连人慢病毒载体;测序及荧光显微镜下观察绿色荧光验证慢病毒载体构建并转染,利用RT—qPCR检测转染后细胞株中CXCR4的mRNA表达,Westernblot检测转染后细胞株中CXCR4、促凋亡蛋白Bax、B细胞白血病-2基因(Bel-2)、Bel-xl及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的蛋白表达;Annexinv/PE双染色流式细胞术检测SKOV3细胞凋亡率,Transwell小室检测转染后卵巢癌细胞株SKOV3的侵袭力。结果:测序结果及微下见绿色荧光蛋白表达,证实成功构建慢病毒载体并转染卵巢癌细胞株SKOV3,成功将特异shCXCR4连入载体;shCX-CR4组mRNA及蛋白表达水平明显低于NC组(P〈0.05);干扰细胞中CXCR4的表达能提高SKOV3细胞中Bax及Cleavedeaspase-3蛋白的表达量,降低Bcl-xl与Bcl-2的蛋白表达,干扰后,SKOV3细胞凋亡率,shCXCR4组细胞凋亡率较CON组和NC组明显增高(P〈0.05);穿膜的细胞数明显减少,抑制率为58.94%,差异有统计学意义(P〈0.01)。结论:慢病毒干扰载体pLVshCXCR4-EGFP(2A)-Puro转染卵巢癌细胞株SKOV3,可以下调细胞株中CXCR4的表达,并能促进卵巢癌细胞的凋亡,并能有效地降低卵巢癌细胞的侵袭能力。
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关键词:卵巢肿瘤 趋化因子受体4 rna干扰 细胞凋亡 侵袭能力
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