摘要：为了探明miR16在体细胞重编程过程中的作用机制，构建小鼠miR-16逆转录病毒载体。根据NCBI上小鼠miR16的相关序列，从小鼠基因组中扩增miR-16核心序列并将其连接到pMD18-simple载体，对重组质粒进行双酶切回收目的片段。将目的片段与pMXs逆转录病毒载体连接，经过酶切、PCR和测序鉴定，最终构建逆转录病毒载体miR16-pMXs；采用脂质体法将miR16-pMXs转染plat-E细胞，以包装逆转录病毒颗粒；用逆转录病毒颗粒侵染小鼠胚胎成纤维细胞，在侵染后的第5天，提取被侵染细胞的总RNA，反转录后获得cDNA，并采用qPCR方法检测侵染前后细胞中miR-16的相对表达量。结果显示，被逆转录病毒侵染后，小鼠成纤维细胞中miR-16的相对表达量比侵染前约提高1460倍。结论：成功构建具有表达活性的microRNA16逆转录病毒载体，为进一步开展miR-16在细胞重编程中的作用机制的相关研究提供了依据。
分类：期刊> 自然科学与工程技术> 农业科技> 畜牧与动物医学
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关键词：microrna 载体构建 表达检测
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