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牛流行热病毒可视化RT—LAMP检测技术的建立及应用

摘要:【目的】建立一种能够快速、简便、可视化地检测牛流行热病毒的分子生物学方法。【方法】根据牛流行热病毒G蛋白基因的6个保守区域设计2对引物,建立牛流行热病毒可视化逆转录环介导等温扩增(Reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)检测技术,优化RT-LAMP的反应条件,将其与PCR方法进行比较。【结果】当Mg2+浓度为3 mmol·L^-1、甜菜碱浓度为0.4 mol·L^-1、dNTPs mix浓度为1.2 μmol·L^-1、内外引物浓度比例为8∶1、反应温度为63 ℃时,反应梯形条带最明显,在反应40 min后可以观察到明显的梯形条带。建立的RT-LAMP检测方法特异性好,只对牛流行热病毒进行扩增;灵敏度比普通PCR高10倍。【结论】该方法操作简便,特异性强,结果判读方便,可用于牛流行热的快速检测。

分类:期刊> 自然科学与工程技术> 农业科技> 农业综合

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关键词:牛流行热 病毒检测 pcr 灵敏性 特异性 

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