摘要：目的构建PRIM1基因的干扰慢病毒载体,供后续深入研究PRIM1基因在肿瘤形成中的机制。方法以PRIM1基因为模板,按照RNA序列设计原则,完成RNA干扰靶点设计后,构建RPIM1基因RNA干扰慢病毒成含干扰序列的单链DNA oligo,退火配对产生双链DNA;随后通过其两端酶切位点直接连入酶切后的慢病毒载体;将连接产物转入制备好的大肠杆菌感受态细胞,PCR鉴定阳性重组子,送测序验证,对测序结果比对正确的克隆进行质粒抽提。结果对RNA序列设计软件评估后选取的干扰靶点序列,经过退火配对得到具有带黏性末端的双链的DNA; Age I和EcoRI双酶切使GV115载体线性化;双链DNA oligo与线性化的载体连接的产物经PCR扩增后的序列与目标序列完全一致,获得测序结果正确的阳性克隆质粒。结论以PRIM1基因为模板,按照载体设计构建常规方法成功构建PRIM1干扰慢病毒载体。
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关键词：载体 慢病毒 干扰 prim1基因 肿瘤
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