摘要：目的建立缺血缺氧损伤细胞模型,探讨永久性缺血缺氧致神经细胞损伤机制及其对PC12细胞自噬的影响。方法采用经典的神经细胞模型PC12细胞作为研究对象,利用无糖的DMEM培养基和缺氧罐（95%N2和5%CO2）培养PC12细胞,模拟体内神经细胞缺血缺氧环境。细胞分为对照组（在正常条件下,使用完全培养基培养细胞）和糖氧剥夺（OGD）处理组（在缺氧条件下,使用OGD培养基培养细胞）：0.5h（OGD＋0.5h）、2h（OGD＋2h）、6 h（OGD＋6h）、12h（OGD＋12h）和24h（OGD＋24h）。利用MTT检测细胞存活率,通过流式细胞仪检测细胞凋亡率,比色法检测细胞乳酸脱氢酶（LDH）释放率,免疫荧光以及Western blotting法检测低氧诱导因子-1α（HIF-1α）、环氧化酶-2（COX2）、微管相关蛋白轻链3（LC3）和Beclin-1的表达,透射电子显微术检测自噬体的超微结构,探讨不同永久性缺血缺氧时间对细胞损伤以及自噬的影响。结果与对照组相比,细胞存活率下降,呈OGD时间依赖性,且自OGD 6h显著下降,差异具有统计学意义（P〈0.05）;细胞凋亡率和坏死率持续增高,与OGD时间呈正相关,且自OGD 12h后显著升高,差异具有统计学意义（P〈0.05）;HIF-1α和COX2蛋白表达随OGD时间延长逐渐升高,OGD 12h后增高显著,差异具有统计学意义（P〈0.05）。OGD组被荧光标记的绿色的LC3蛋白相对于对照组,数量增多,绿色荧光增强。Beclin-1蛋白表达结果显示,Beclin-1的表达与OGD时间呈正相关,并由OGD6h开始明显增加,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论缺血缺氧能够诱导PC12细胞氧化应激及自噬激活。
分类：期刊> 自然科学与工程技术> 医药卫生科技> 基础医学
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关键词：缺血 缺氧 糖氧剥夺 氧化应激 免疫印迹法 pc12细胞
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