摘要:[目的]观察沉默四次跨膜超家族蛋白3 (Tspan8)对人结肠癌HT-29细胞移植瘤和转移灶中Rap1和Rap1 GAP蛋白的影响.[方法]通过生物信息学方法,结合R2平台中的1个基因芯片数据集,以Dukes分期筛选出自身表达与Tspan8表达显著相关的基因,利用KEGG工具对Tspan8相关的基因进行KEGG通路分析.利用慢病毒沉默技术沉默Tspan8在人结肠癌细胞株HT-29中的表达,RT-PCR及免疫组化技术检测HT 29细胞干扰后Tspan8沉默效果,构建结肠癌HT 29细胞转移动物模型.慢病毒沉默HT-29细胞中的Tspan8基因(shRNA-+-Tspan8+HT-29细胞)为实验组、空载体组为对照组,观察2组移植瘤生长情况.Western blot技术检测裸鼠肝脏转移灶中Rap1、Rap1 GAP的表达情况.[结果]与Tspan8相关的KEGG通路中,Rap1通路在DukeC期及DukeD期中与Tspan8表达存在相关性(P<0.05).RT-PCR结果表明Tspan8 mRNA表达水平在实验组中较对照组明显下调(P<0.05).沉默Tspan8后,裸鼠肝转移瘤的数目减少、体积和重量变小,免疫组化结果提示实验组肝脏转移瘤组织Tspan8表达均较对照组小鼠明显减少(P<0.05),Western Blot示Rap1、Rap1 GAP在实验组肝脏肿瘤组织表达较对照组改变具有统计学意义(P<0.05).[结论]沉默Tspan8通过Rap1 GAP影响Rap1蛋白活性抑制HT-29细胞肝脏转移.
分类:期刊> 自然科学与工程技术> 医药卫生科技> 消化系统疾病
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关键词:结肠肿瘤 四次跨膜超家族蛋白3 生物信息学 tspan8
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