摘要：反式-4-羟脯氨酸在多领域具有重要应用价值。为了进一步提高反式-4-羟脯氨酸的产量,在已构建好的E.coliBL21(DE3)△putA的基础上,敲除基因sucA的同时插入密码子优化后的反式-4-羟化酶基因(hyp),并将构建好的质粒pUC19-ptrp2-hyp-vgb导入该基因敲除菌株中。之后在摇瓶水平上,单因素优化发酵条件与发酵培养基的组分,并通过正交实验进一步确定敲除菌株的培养条件。结果表明:与含有同样质粒的原菌和两种单敲除菌E.coliBL21(DE3)△sucA、E.coliBL21(DE3)△putA相比,E.coliBL21(DE3)△putA△sucA双敲除菌具有最高的全细胞酶活,大约是原菌的2.6倍;在摇瓶水平上,发酵条件优化后,以100mmol/L的L-脯氨酸为底物进行发酵,12h后可得到1.08g/L的羟脯氨酸,是优化前的3.87倍。
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关键词：suca 透明颤菌血红蛋白 基因敲除 重组大肠杆菌 全细胞酶活
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