摘要：为了提高磷脂酶在毕赤酵母中的表达量,构建了N-乙酰转移酶(Mpr1)和磷脂酶共表达的重组毕赤酵母。Mpr1是一类能催化乙酰基团在乙酰辅酶A和胺之间转移的胞内酶,能够降低酵母细胞内的ROS水平,具有抗活性氧(ROS)氧化胁迫生理功能。来源于尖孢镰刀菌的磷脂酶(phospholipase)是一类可以将磷脂水解为小分子脂肪酸、甘二酯和磷酸胆碱的胞外酶。研究了Mpr1对重组菌的生长和磷脂酶表达量的影响。为了获得在3.6L发酵罐中表达磷脂酶的最佳发酵条件,分别从诱导温度、起始诱导菌体浓度和甲醇诱导浓度3个方面研究了重组菌的高密度发酵,以恒溶氧反馈调节补加甘油和甲醇流加仪在线监测流加甲醇。结果表明:当诱导温度、起始诱导菌体质量浓度和甲醇诱导体积分数分别为28℃,40g/L和1.0%,诱导120h后磷脂酶活达到最高,为8100U/mL,总蛋白含量为8.3mg/mL,为前期工作中磷脂酶单独表达时的1.33倍。
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关键词：毕赤酵母 尖孢镰刀菌 磷脂酶 高密度发酵
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