摘要：青鳉（Oryzias latipes）是研究遗传发育和细胞多能性的重要模式鱼类, 为探究prdm14同源基因的潜在作用, 实验将青鳉prmd14经原核表达后制备了兔抗Prdm14多克隆抗体.首先, 将prdm14基因的部分编码区连接到pET32a质粒中, 构建重组表达载体pET32a-prdm14？600.随后将重组载体转化至大肠杆菌（Escherichiacoli）Rosetta（DE3）, 经异丙基-β-d-硫代半乳糖苷（Isopropyl-β-d-thiogalactoside, IPTG）诱导表达, 获得分子量为60 kD的Prdm14重组蛋白.接着大量诱导蛋白表达并切胶纯化, 免疫家兔（Oryctolagus cuniculus）, 6周后获得阳性抗体, 最后通过ELISA和Western blot检测抗体效价及其特异性.结果显示, 在37℃、0.6 mmol/L IPTG、诱导3h的条件下, 可获得Prdm14重组蛋白的高效表达; 制备的兔抗青鳉Prdm14多克隆抗体能够特异性识别青鳉组织中表达的Prdm14蛋白以及在HepG2细胞中过表达的青鳉Prdm14： EGFP融合蛋白.综上所述, 研究首次制备了-种能有效识别青鳉Prdm14的多克隆抗体, 该抗体的获得为后续研究prdm14基因在鱼类多能性干细胞中的作用提供了有力工具.
分类：期刊> 自然科学与工程技术> 农业科技> 水产和渔业
收录：北大期刊(中国人文社会科学期刊) > CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版) > 统计源期刊(中国科技论文优秀期刊) > 知网收录(中) > 维普收录(中) > 万方收录(中) > CA 化学文摘(美) > JST 日本科学技术振兴机构数据库(日) > 剑桥科学文摘 > 国家图书馆馆藏 > 上海图书馆馆藏
关键词：青鳉 prdm14 原核表达 多克隆抗体 干细胞
注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社
