摘要：目的：克隆表达2型猪链球菌N-乙酰氨基葡糖-6-磷酸脱乙酰酶（NagA）的编码基因,并测定其酶活性。方法：根据GenBank中05ZYH33基因组序列设计引物,PCR扩增NagA（SSU05_1259）基因,将其克隆到pET28a载体中,构建重组质粒pET28a：NagA,转化至大肠杆菌BL21,筛选阳性转化子进行IPTG诱导表达,产物通过SDS-PAGE与质谱鉴定;利用Ni亲和层析柱对表达产物进行纯化,获得NagA重组蛋白后测定其酶活性。结果：在大肠杆菌中高效表达了NagA基因,重组表达的NagA相对分子质量约为43×10^3,其酶促反应最适温度为37℃,最佳反应时间为30min,最适反应pH值为7.5,最佳底物浓度为13mmol/L。2型猪链球菌NagA的体外酶活为124U/mL,酶比活为78U/mg。结论：在原核系统中表达了NagA基因,获得的NagA蛋白具有良好的酶学活性。
分类：期刊> 自然科学与工程技术> 基础科学> 生物学
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关键词：2型猪链球菌 原核表达 酶活性
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