摘要：希瓦氏菌（Shewanella marinintestina MCCC 1A01703）是从海洋动物肠道分离得到的1株产二十碳五烯酸（Ecicosapentaenoic acid,EPA）的海洋细菌。利用PCR方法、Overlap PCR及Gibson Assemble技术克隆该菌中包含pfaA、pfaB、pfaC和pfaD的EPA生物合成基因簇,全长18.4 kb。序列分析表明所钓取的合成基因簇与来自希瓦氏菌SCRC-2738的EPA合成基因簇有88%的相似度,均编码聚酮合酶。以构建的低拷贝表达载体pACYC-Trc为骨架,通过Gibson Assemble技术构建EPA基因簇表达质粒pLYSCY03。钓取大肠埃希菌（Escherichia coli DH5α）细胞中的entD基因,克隆至表达载体pTrc99a中,构建成为重组质粒pLYSCY01。将两个表达质粒同时导入大肠埃希菌（Escherichia coli DH5α）中,获得产EPA的工程菌株。结果表明,希瓦氏菌中含有EPA聚酮生物合成基因簇,大肠埃希菌（Escherichia coli DH5α）中的entD基因可以替代pfaE基因与钓取的EPA合成基因协同合成EPA。
分类：期刊> 自然科学与工程技术> 基础科学> 生物学
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关键词：希瓦氏菌 二十碳五烯酸 生物合成基因簇 异源表达
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