摘要：本课题组早期研究结果表明,炭疽芽胞杆菌BA2380蛋白可能与炭疽芽胞杆菌毒力有关,因而有必要对其功能进行深入研究。选取炭疽芽胞杆菌A16D2株为出发菌株,以其BA2380基因为目的缺失基因,参照A16D2株基因组序列及质粒pSET4s序列,利用软件设计上下游同源臂及抗性基因引物,用本实验室改造的＂Golden Gate＂克隆方法将3个片段同时连入温敏型穿梭载体pKMBK中（本实验室构建的受体质粒）,从而构建基因打靶质粒。将该基因打靶质粒导入炭疽芽胞杆菌A16D2感受态细胞中,利用同源重组原理,筛选获得炭疽芽胞杆菌A16D2 BA2380基因缺失突变株,并对其进行验证。结果验证了本课题组构建的＂Golden Gate＂克隆体系进行多片段克隆的高效性,也为后续探索其基因功能奠定了基础。
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关键词：炭疽芽胞杆菌 golden gate克隆 基因替换 同源重组
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