摘要：【目的】建兰花叶病毒(CyMV)和齿兰环斑病毒(ORSV)是侵染蝴蝶兰最主要的2种病毒,给蝴蝶兰产业造成巨大经济损失。本文建立了快速检测这2种病毒的方法,并为培育同时抗CyMV和ORSV的蝴蝶兰新品种奠定基础。【方法】根据2种病毒CP基因序列设计了2对特异性引物,运用RT-PCR方法同时检测这2种病毒,利用反义RNA技术构建2种病毒CP基因的融合表达载体。【结果】利用设计的特异性引物检测12株蝴蝶兰样品,有25%同时检测出2种病毒,在同一PCR反应体系中,扩增出2个目的条带清晰无杂带。从感病蝴蝶兰叶片总RNA中克隆出CyMVCP基因的125bp片段和ORSVCP基因的164bp片段。将CyMV的CP基因片段以3’→5’方向与表达载体pCAMBIA1300连接,命名为pCAMBIA1300-CyMV,经酶切及菌落PCR鉴定可获得125bp的小片段;再将ORSV的CP基因片段以3’→5’方向与pCAMBIA1300-CyMV连接,命名pCAMBIA1300-CyMV-ORSV,经酶切及菌落PCR鉴定可获得289bp的片段。【结论】所设计的2对特异性引物能够在同一PCR体系中快速高效地检测出CyMV和ORSV,含2种病毒CP基因的反义融合表达载体构建成功。
分类：期刊> 自然科学与工程技术> 农业科技> 农业综合
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关键词：蝴蝶兰 建兰花叶病毒 齿兰环斑病毒 外壳蛋白基因 融合反义基因
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