摘要：目的：用重叠PCR方法将IKBA基因三个碱基进行点突变A94G、G95C、T106G.方法：根据重叠PCR原理设计IKBA基因两条末端引物及A94G、G95C、T106G突变引物,从HUVEC细胞克隆IKBA基因,将其作为模板进行第一次PCR,将第一次PCR产物稀释10000-50000倍后作为模板,扩增突变体IKBAm,并克隆到pLVX-IRES-ZsGreen载体,用双酶切及DNA测序筛选阳性质粒.结果：从HUVEC细胞克隆的IKBA基因及其突变体IKBAm基因长度均为954 bp,编码317个氨基酸,与IKBA基因相比,突变体IKBAm基因3个位点发生突变94A→G,95G→C,106T→G,编码的32/36位氨基酸由Ser突变为Ala.结论：成功克隆人IKBA基因及其32/36 Ser→Ala突变体IKBAm.
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关键词：重叠pcr ikba 点突变
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