摘要：本研究以引起珍珠龙胆石斑[Epinephelusfuscoguttatus（早）×Epinepheluslanceolatus（d）]幼鱼“皮肤溃疡病”的哈维氏弧菌（Vibrioharveyi）ML01株为研究对象，采用平板膜覆盖技术和柱层析技术，分离、纯化了ML01株的胞外产物及分泌性蛋白。应用毒性试验、质谱分析与分子克隆技术，对纯化的胞外产物和3种主要的分泌性蛋白进行了特性分析与鉴定。结果显示，哈维氏弧菌ML01株的胞外产物（Extracellularproducts，ECPs）具有酯酶、明胶酶、淀粉酶、酪蛋白酶活性，无脲酶活性。ECPs对羊红细胞无溶血性，对斑马鱼（Daniorerio）~半数致死剂量（LD50）为19．55μg／g鱼体重。从ML01株中分离到3种主要的分泌蛋白P42、P36、P31，其分子量分别为42、36、31kDa。经质谱鉴定和分析，这3种蛋白分别为哈维氏弧菌的外膜蛋白OmpU和OmpN，以及一种功能未知的蛋白。利用同源克隆，成功地从ML01株基因组中扩增到了P42、P36、P31的基因。序列测定和比对结果显示，ML01株的这3个基因与哈维氏弧菌ATCC33843（GenBankCP009467）的相应基因相比，其开放阅读框（Openreadingframe，ORE）序列的相似性分别为97．08％、100％、99．67％，其编码的多肽序列的相似性分别为99．71％、100％和99．93％。本研究对进一步分析哈维氏弧菌ML01株的致病机理、研发该菌的亚单位疫苗具有重要的参考价值。
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关键词：哈维氏弧菌 胞外产物 分泌性蛋白 质谱分析 基因克隆
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