摘要：目的构建融合基因CTB-Emy162原核表达系统，纯化得到多房棘球蚴重组蛋白CTB-Emy162。方法根据多房棘球蚴抗原Emy162在GenBank中的序列，用生物信息学软件Optimum TM Codon优化密码子适应指数（CAI）、最优密码子频率（FOP）及GC含量从而获得适合大肠杆菌BL-21表达的Emy162基因序列。PCR扩增Emy162基因，定向在pET-28a-CTB的CTB基因5’端插入Emy162基因。构建CTB和Emy162双基因原核表达质粒pET28a-CTB-Emy162，将该质粒转化于E．coli BL-21（DE3）中，经IPTG诱导蛋白表达后，利用Ni-NTA柱亲和层析及离子交换色谱纯化后获得目的蛋白。结果OptimumTMCodon获得优化后的Emy162序列，经生物公司测序及酶切鉴定结果证明重组质粒pET28a-CTB-Emy162构建成功，进一步实验结果表明CTB-Emy162在原核表达系统pET-28a中主要以包涵体形式存在，在可溶部位少量表达。继而经Ni-NTA柱亲和纯化及离子交换色谱纯化获得CTB-Emy162纯蛋白。结论以大肠杆菌E．coli BL-21（DE3）及pET-28a构成的原核表达系统能够成功表达重组蛋白CTB-Emy162，Ni-NTA纯化柱能够纯化目的蛋白CTB-Emy162。
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关键词：多房棘球蚴 emy162 原核表达系统
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