摘要：目的：探讨慢病毒介导的稳定过表达生长分化因子5（GDF-5）基因大鼠脂肪干细胞（ASCs）的构建条件和方法。方法：取大鼠腹股沟脂肪垫组织,采用Ⅰ型胶原酶消化贴壁法分离培养大鼠ASCs。倒置相差显微镜观察细胞形态,CCK-8法测定细胞生长曲线,流式细胞仪鉴定细胞表型。制备带GDF-5/GFP融合基因的慢病毒载体系统,探索不同感染复数（MOI=1、5、10、20、40、60、80、100）的转染效率,选择最佳MOI,采用流式细胞仪检测转染效率。对转染细胞行流式细胞筛选,测定筛选后转染细胞的阳性率。筛选出的细胞行细胞爬片,DAPI染色,形态学上进一步验证细胞阳性率;并采用CCK-8法检测转染后细胞活力。结果：成功培养大鼠ASCs,流式细胞免疫表型鉴定：间充质干细胞表面抗原（CD90、CD29、CD44、CD105）表达阳性,造血细胞表面抗原（CD45、CD34）和骨髓干细胞表面抗原（CD106）表达阴性。成功构建GDF-5过表达慢病毒载体系统,慢病毒转染大鼠ASCs最佳MOI为40,转染率为65%。采用GFP荧光流式细胞筛选技术筛选后阳性率可提高至96%。CCK-8法显示,转染后细胞活力、生长曲线与未转染细胞无明显差异。结论：胶原酶消化法可成功培养大鼠ASCs,流式细胞筛选技术可显著提高转染细胞阳性率,且对细胞系活力无显著影响。
分类：期刊> 自然科学与工程技术> 医药卫生科技> 临床医学
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关键词：脂肪干细胞 慢病毒 生长分化因子5 转染
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