摘要：为研究鼠伤寒沙门菌5＇-nucleotidase基因的序列特征,本研究应用PCR扩增得到鼠伤寒沙门菌SL1344株的5＇-nucleotidase基因片段,利用在线网站和DNAMAN 6.0.3.48软件进行其核苷酸和氨基酸序列的同源性分析。然后将目的基因亚克隆至原核表达载体pET32a构建重组表达质粒（pET32a-5＇-nucleotidase）,转入大肠杆菌Rosetta中经IPTG诱导表达,亲和层析法纯化后采用SDS-PAGE和western blot进行分析。采用酶切活性试验分析重组蛋白的核酸酶活性。结果显示,鼠伤寒沙门菌SL1344株5＇-nucleotidase基因为1 482 bp,5＇-nucleotidase核苷酸序列与其它22种微生物的5＇-nucleotidase及其类似物的同源性较低,最高仅为52.8%。理论上蛋白的分子量为57.18 ku,编码523个氨基酸。SDS-PAGE和western blot结果显示5＇-nucleotidase重组蛋白约72 ku,且以可溶性和包涵体两种形式表达。同时,酶切活性试验结果显示重组5＇-nucleotidase蛋白具有降解DNA的能力。本实验克隆了鼠伤寒沙门菌5＇-nucleotidase基因,并表达得到了具有核酸酶活性的重组蛋白,为进一步研究5＇-nucleotidase基因在鼠伤寒沙门菌感染中的作用奠定基础。
分类：期刊> 自然科学与工程技术> 农业科技> 畜牧与动物医学
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关键词：鼠伤寒沙门菌 克隆 序列分析 原核表达
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