摘要:目的建立能同时检测抗HCV-免疫球蛋白(Ig)M和抗HCV-IgG抗体的时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)法。方法采用HCV重组抗原包被,制备Eu3+标记抗人IgM和Sm3+标记抗人IgG抗体;采用间接法建立HCV-IgM和HCV-IgG TRFIA并行优化和方法学考核。用百分位数法单侧95%计算阳性判定(CO)值。结果以1个样本检测值/阳性判定值(S/CO)为单位,HCV-IgM和HCV-IgG的检测灵敏度分别为0.06和0.15 S/CO。分别将HCV-IgM和HCV-IgG强阳性的标本从1∶12.5倍比稀释到1∶51 200,HCV-IgM在1∶12.5~1∶12 800呈较好线性反应,HCV-IgG在1∶25~1∶6 400呈较好线性反应。HCV-IgM和HCV-IgG的平均批内CV分别为3.37%和3.66%,平均批间CV分别为6.52%和6.75%。用酶联免疫吸附测定法作为参照,检测HCV阳性标本和阴性标本各20例,两者HCV-IgM阳性符合率为100.0%(20/20),阴性符合率为90.0%(18/20),总符合率为95.0%(38/40);HCV-IgG相应数据分别为100.0%(20/20)、95.0%(19/20)和97.5%(39/40)。试剂盒于37 ℃放置7 d检测,荧光计数值分别下降11.1%和9.5%,稳定性能良好。结论建立的HCV-IgM和HCV-IgG TRFIA双标记分析法1次测量可同时得到HCV-IgM和HCV-IgG结果,是一种宽量程、高特异性、高灵敏度、稳定性好的方法。
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关键词:肝炎抗体 丙型 荧光免疫测定 铕 钐
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