摘要：目的分离纯化重组蟹金属硫蛋白（MT）并探讨其抗氧化作用：方法利用前期已构建的绒螯蟹重组质粒pET—GST—MT，大量诱导表达重组蛋白GST—MT，采用锌柱亲和层析和乙二胺四乙酸（EDTA）洗脱液分离纯化重组GST—MT，十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）和Western免疫印迹进行重组GST—MT的分析鉴定。对10只新西兰大白兔耳缘静脉注射纯化后的重组GST—MT（3mg／kg），分别于注射前和注射后不同时间段（6h、1、2、3d和5d）取血，测定血清中的谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）含量及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）、超氧化物歧化酶（SOD）活性和总抗氧化能力（T-AOC）。结果EDTA洗脱液可完全洗脱重组蛋白，SDS—PAGE和Western免疫印迹均证实其为高纯度的含锌GST—MT。重组GST—MT注射后所有时相新西兰大白兔血清中MDA含量明显低于注射前，T—AOC活性显著增加（P〈0．05），除注射后6h之外，其余时间段GSH含量和GSH—Px、SOD活性变化无统计学意义（P〉0．05）。结论锌柱亲和层析结合EDTA洗脱液可简化GST-MT的纯化步骤并提高其纯度。GST—MT在短期内可增强实验兔体内抗氧化酶活性。
分类：期刊> 人文社会科学> 社会科学II> 教育综合
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关键词：金属硫蛋白 重组融合蛋白质类 分离和提纯 亲和层析 抗氧化
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