摘要：目的建立可靠的HLA-Cw基因全长序列的分子克隆和测序技术。方法设计合成HLA-Cw基因全长序列PCR引物和探索PCR反应体系，采用长距离PCR技术，扩增HLA-Cw基因非翻译区（untranslatedregion，5′-UTR）区、8个外显子、7个内含子和3′-UTR区，全长约4．5kb。PCR产物纯化后进行分子克隆，筛选阳性克隆，提取质粒DNA，采用自行设计的测序引物进行全长双向测序。12份已经AlleleSEQRHI。A-Cw测序分型试剂盒进行PCR产物直接测序、基因型已知的样本，分别用TaKaRaLATaq酶和StratagenePfuTaqDNA聚合酶进行HI，A-Cw基因全长扩增，以及PCR产物分子克隆和序列测定，克隆测序结果分别与PCR产物直接测序结果进行对比分析。结果PCR扩增获得了特异性目的片段，测序获得了HLA-Cw基因-962～3576位碱基全长序列。克隆测序结果的对比表明，Pfu酶保真性高于LATaq酶。比较本文测定的Cw＊010201与Cw＊07020101等位基因序列，在5′上游-962～-284位碱基区域存在11个单核苷酸多态（single nucleotide polymorphisms，SNPs）和2个插入（或）缺失多态性位点；3′-UTR下游3067～3576位碱基区域存在11个SNPs和1个插入（或）缺失。结论建立了HLA—Cw基因全长序列分子克隆及测序方法，在HLA—Cw基因全长序列分子多态性及表达调控等研究领域，具有广泛应用前景。
分类：期刊> 自然科学与工程技术> 医药卫生科技> 基础医学
收录：CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版) > 统计源期刊(中国科技论文优秀期刊) > 知网收录(中) > 维普收录(中) > 万方收录(中) > CA 化学文摘(美) > JST 日本科学技术振兴机构数据库(日) > Pж(AJ) 文摘杂志(俄) > 哥白尼索引(波兰) > 剑桥科学文摘 > 文摘与引文数据库 > 文摘杂志 > 医学文摘
关键词：人类白细胞抗原 全长序列 克隆 测序
注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社
