摘要：目的克隆大鼠转化生长因子β1（TGFβ1）基因并转染肝星状细胞（Hepatic stellate cells，HSC），筛选稳定高表达TGF β1的阳性克隆。方法采用逆转录-聚合酶链式应（RT-PCR）从大鼠成骨细胞中扩增出特异性片段，经酶切鉴定证实为大鼠TGFβ1 cDNA，将此片段插入pcDNA3．1（＋）表达载体，构建得到pcDNA3．1（＋）-TGFβ1重组质粒。应用阳离子脂质体介导的基因转移技术将TGFβ1表达载体导入大鼠HSC，经G418筛选高表达TGFβ1的阳性克隆，用荧光定量PCR法及Western blot法检测TGFβ1 mRNA及蛋白的表达。结果重组真核表达载体pcDNA3.1（＋）-TGFβ1经限制性内切酶BamHI酶切，电泳后显示的TGFβ1目的片段和5．4kb的pcDNA3．1（＋）载体片段，测序证实酶切片段与GenBank中登记的TGFβ1全长序列相同，证实pcDNA3.1（＋）-TGFβ1真核表达载体构建成功，转染HSC并经G418筛选出阳性克隆后，TGFβ1 mRNA及蛋白的表达明显增高（P〈0．05）。结论重组TGFβ1真核表达载体构建正确，并可成功转染HSC，经G418筛选可获得稳定表达TGFβ1的HSC阳性克隆。
分类：期刊> 自然科学与工程技术> 医药卫生科技> 临床医学
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关键词：分子克隆 肝星状细胞
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