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抗体芯片筛选黄芩苷诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的作用靶点

摘要:目的采用凋亡抗体芯片筛选黄芩苷诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的作用通路和靶点,探讨黄芩苷诱导胃癌细胞凋亡的相关机制。方法采用MTT法检测黄芩苷对SGC-7901细胞的增殖抑制作用;采用流式细胞术检测细胞凋亡情况;采用人凋亡抗体芯片双抗体夹心检测法筛选出黄芩苷(120μmo L·L^-1)组与对照组的差异表达蛋白;采用Western Blot法对筛选出的差异蛋白Caspase-3、Caspase-8、Fas L、XIAP进行验证,增加对Fas、Caspase-9、TRAIL蛋白的检测。结果与对照组比较,20-320μmo L·L^-1的黄芩苷在24-96 h不同时间点可抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖(P〈0.05,P〈0.01,P〈0.001),且呈浓度和时间依赖性;80,120,160μmo L·L^-1黄芩苷均可诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡(P〈0.01),且呈浓度依赖性;凋亡抗体芯片检测结果表明,120μmo L·L^-1黄芩苷组的bad、Caspase-3、Caspase-8、Fas L、HSP60、TRAIL R4、IGF-I、IGF-II、p21、p27、p53和SMAC等蛋白表达明显上调,而XIAP蛋白表达显著下调,差异均有统计学意义(P〈0.05,P〈0.01)。Western Blot验证实验结果表明,160μmo L·L^-1浓度组的Fas L蛋白相对表达量显著上升(P〈0.001);120,160μmo L·L^-1浓度组的Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Fas、TRAIL蛋白相对表达量显著上升(P〈0.01,P〈0.001),XIAP蛋白相对表达量显著下调(P〈0.001)。结论黄芩苷诱导胃癌细胞凋亡的抗肿瘤作用机制与Fas L、TRAIL介导的死亡受体有关;抗体芯片是有效的靶点筛选手段,可用于药物作用靶点和药理机制研究。

分类:期刊> 自然科学与工程技术> 医药卫生科技> 中药学

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关键词:黄芩苷 胃癌细胞 凋亡 作用靶点 死亡受体 抗体芯片 

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